1. 产品描述：
Fluo-4 是一种将 Fluo-3 结构中的 Cl 替换成 F 的钙荧光探针。由于将 Cl 替换
成了电子吸引力更强的 F，它的最大激发波长会向短波长处偏离 10 nm 左右。这
个波长更接近于氩激光器的波长，所以用氩激光器激发时，Fluo-4 的荧光强度比
Fluo-3 强一倍。
Fluo-4, AM 穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成 Fluo-4，从而被
滞留在细胞内，Fluo-4 若以游离配体形式存在时几乎是非荧光性的，但是当它与
细胞内钙离子结合后可以产生较强的荧光，最大激发波长为 494nm，最大发射波
长为 516nm。可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度的
变化。
2. 操作说明（for Human T cells）*
（1） 试剂
2 mM 的 Fluo-4, AM/DMSO（将 1mg Fluo-4, AM 溶于 442µL DMSO）
Pluronic F127
Hanks•balanced salt solution（HBSS）
HEPES buffer saline（10mM HEPES，1mM Na2HPO4，137mM NaCl，5mM KCl，
1mM CaCl2，0.5mM MgCl2，5mM glucose，0.1% BSA，pH 7.4）
（2） 操作
①. 向 Fluo-4, AM/DMSO 溶液中加入 16.5mg Pluronic F127，Pluronic F127 可以
防止 Fluo-4, AM 在 HBSS 中聚合并能帮助其进入细胞。
②. 用 HBSS 稀释 Fluo-4, AM 溶液，制备 4µM 的 Fluo-4, AM 工作液。
③. 将 Fluo-4, AM 工作液加入细胞，在 37℃培养 20 分钟。
④. 加入 5 倍体积的含有 1%胎牛血清的 HBSS，再继续培养 40 分钟。
⑤. 用 HEPES buffer saline 洗涤细胞 3 次，然后用 HEPES buffer saline 使细胞重
悬浮，制成 1×10 5 cells/mL 的溶液。
⑥. 37℃下培养 10 分钟，然后用该细胞进行荧光钙离子检测。激发波长 494nm，
发射波长 516nm。
*标记的条件因细胞种类而异，在每次实验前，请先确定最佳条件。以上方法仅
供参考。
储存条件：-20℃干燥避光保存
